干熱處理是在制品凍干后進(jin)行的(de)熱處理。該(gai)技術處理溫度為60~100℃，持續時間為30min~4d，需要加入穩定劑，防止蛋白過度變性(xing)。一(yi)般，溫(wen)度(du)(du)越高，病(bing)毒滅活時間越短。影響干(gan)熱法病(bing)毒滅活效(xiao)果(guo)的(de)因(yin)(yin)素(su)有很多(duo)，如制品(pin)中組分/蛋白質濃度(du)(du)/凍(dong)干(gan)穩定劑成分和(he)濃度(du)(du)的(de)差異(yi)，制品(pin)最終容器的(de)大(da)小/分裝量/凍(dong)干(gan)曲線和(he)封口形式的(de)差異(yi)等，因(yin)(yin)此，實際生產過程(cheng)需要(yao)嚴格操作(zuo)。

巴氏(shi)消毒法是指在60±0.5℃的(de)環境下，將蛋白質(zhi)溶液進(jin)行連續加熱(re)處理（≥10小時），從(cong)而(er)破壞(huai)病毒蛋白質(zhi)及核酸分子(zi)結構，使其因變性而(er)無法復制，從(cong)而(er)失去(qu)傳染性。該方(fang)法所(suo)采(cai)用的高溫條(tiao)件會使制品中蛋白產品過度變性，因此需(xu)要加入穩(wen)定劑以保(bao)護蛋白聚(ju)合及(ji)功能活性。

S/D（solvent/detergent）法(fa)是(shi)指利用有機溶劑和(he)非離子表面活性劑的(de)(de)組合分解脂(zhi)(zhi)包(bao)膜病毒(du)(du)的(de)(de)類(lei)脂(zhi)(zhi)膜，破壞脂(zhi)(zhi)包(bao)膜病毒(du)(du)的(de)(de)類(lei)脂(zhi)(zhi)膜，類(lei)脂(zhi)(zhi)從病毒(du)(du)表面脫落(luo)，使病毒(du)(du)失去粘附和(he)感染細(xi)胞的(de)(de)能(neng)力來達到(dao)滅活病毒(du)(du)的(de)(de)效果。

有機溶劑常用磷酸三丁酯（TNBP）；非離子表面活性劑如Triton X-100或Tween80，有報道也用Triton X-45等。S/D處理可以滅活脂包膜病毒，對非脂包膜病毒無效。

使用S/D滅活，下游必須有工(gong)藝能(neng)夠(gou)把S/D試劑(ji)去除，另外S/D試劑(ji)對動物細胞有較(jiao)強毒(du)性，會影響(xiang)指(zhi)示病毒(du)滴度測定檢(jian)測限，因此(ci)該工(gong)藝的(de)驗證需要盡可能(neng)提高加入指(zhi)示病毒(du)的(de)初始滴度或提高病毒(du)檢(jian)測方法的(de)靈敏度。

低pH孵放法是重組蛋白藥物純化工(gong)藝中常用的關(guan)鍵步驟，其操作(zuo)過程簡單、病(bing)(bing)毒(du)(du)滅活效果好，其利(li)用有脂包膜類(lei)病(bing)(bing)毒(du)(du)的囊(nang)膜和(he)病(bing)(bing)毒(du)(du)衣殼蛋白在低pH條件下會逐漸變性而使病(bing)(bing)毒(du)(du)顆粒失去(qu)感(gan)染能力，從而達到病(bing)(bing)毒(du)(du)滅活效果。

低pH孵放(fang)不僅可(ke)以(yi)滅(mie)(mie)活(huo)有脂包(bao)(bao)膜(mo)類病(bing)毒，還可(ke)以(yi)沉淀(dian)HCP、DNA等(deng)雜(za)質(zhi)，對純(chun)化(hua)工藝中的雜(za)質(zhi)去(qu)除也起(qi)到重要(yao)作用。本方法(fa)對于無脂包(bao)(bao)膜(mo)類病(bing)毒則作用微(wei)弱，但在工藝中的低pH（如pH4）處理（有時(shi)加胃(wei)酶）能滅(mie)(mie)活(huo)幾種脂包(bao)(bao)膜(mo)病(bing)毒。除此之外，病(bing)毒滅(mie)(mie)活(huo)效(xiao)果還可(ke)能受pH值、孵放(fang)時(shi)間(jian)和溫度(du)、胃(wei)酶含(han)(han)量(liang)(liang)、蛋白質(zhi)濃度(du)、溶(rong)質(zhi)含(han)(han)量(liang)(liang)等(deng)因素(su)影響，滅(mie)(mie)活(huo)效(xiao)果隨(sui)著(zhu)(zhu)pH升(sheng)(sheng)高滅(mie)(mie)活(huo)效(xiao)果降低，隨(sui)著(zhu)(zhu)溫度(du)升(sheng)(sheng)高滅(mie)(mie)活(huo)效(xiao)果升(sheng)(sheng)高。

柱層析(xi)法(fa)（也稱色譜(pu)）根據蛋白(bai)質的理化性質的不(bu)同，進行蛋白(bai)分(fen)離(li)純(chun)化，從而(er)有(you)效分(fen)離(li)雜蛋白(bai)及(ji)消(xiao)除(chu)病毒等污染物。柱層(ceng)析(xi)法(fa)包括親和(he)層(ceng)析(xi)、離子(zi)交換層(ceng)析(xi)、疏水層(ceng)析(xi)、反相層(ceng)析(xi)等。使用(yong)親和(he)層(ceng)析(xi)去除病毒主要依靠病毒在(zai)親和(he)填料中和(he)其(qi)他非(fei)目標蛋白(bai)的雜質發酵液(ye)成分(fen)一起流(liu)穿，并(bing)且不(bu)受填料壽(shou)命的影響。

離(li)子交(jiao)換(huan)層(ceng)析(xi)(xi)去除病毒(du)的能力主要是以(yi)靜電作(zuo)(zuo)用(yong)為主導作(zuo)(zuo)用(yong)，以(yi)陰(yin)離(li)子層(ceng)析(xi)(xi)（流穿(chuan)模式）為例，在緩沖液為中(zhong)性或弱堿性（如pH8.0）條件(jian)下，病毒(du)帶負電荷(he)(he)，可以(yi)和填料(liao)帶正電荷(he)(he)的季(ji)銨陽離(li)子結(jie)合(he)，從而結(jie)合(he)到(dao)層(ceng)析(xi)(xi)填料(liao)上(shang)，而目的蛋白則流穿(chuan)，最終達到(dao)病毒(du)去除的作(zuo)(zuo)用(yong)。

病(bing)毒膜過濾(lv)是利用病毒(du)和蛋白(bai)大小的不(bu)同，使小于(yu)平(ping)均孔徑(jing)的蛋白(bai)通(tong)過濾膜，將大于(yu)平(ping)均孔徑(jing)的病毒(du)截留在膜內，從(cong)而達到(dao)去(qu)除病毒(du)的效果。

病毒(du)(du)(du)(du)去(qu)(qu)除(chu)膜(mo)過(guo)濾(lv)可以(yi)同時滿足病毒(du)(du)(du)(du)去(qu)(qu)除(chu)效果好(hao)、目(mu)的(de)(de)蛋(dan)白質通過(guo)性高(回(hui)收(shou)量、過(guo)濾(lv)時間)、目(mu)的(de)(de)蛋(dan)白質不(bu)變性的(de)(de)特點，另外不(bu)管是(shi)脂包膜(mo)病毒(du)(du)(du)(du)還是(shi)非脂包膜(mo)病毒(du)(du)(du)(du),無論病毒(du)(du)(du)(du)基(ji)因組(zu)是(shi) RNA還是(shi)DNA，基(ji)本靠(kao)(kao)孔徑(jing)大小來(lai)去(qu)(qu)除(chu)病毒(du)(du)(du)(du)，所(suo)以(yi)是(shi)當前最可靠(kao)(kao)的(de)(de)病毒(du)(du)(du)(du)去(qu)(qu)除(chu)技術。根據目(mu)的(de)(de)蛋(dan)白的(de)(de)大小，可以(yi)選擇平均孔徑(jing)不(bu)同的(de)(de)濾(lv)膜(mo)，其(qi)中平均孔徑(jing)為20nm左右的(de)(de)產(chan)品被(bei)稱為細小病毒(du)(du)(du)(du)濾(lv)膜(mo)。平均孔徑(jing) 35~ 50 nm的(de)(de)濾(lv)膜(mo)被(bei)稱為逆轉錄酶(mei)病毒(du)(du)(du)(du)濾(lv)膜(mo)。

根據PDA Technical Report 41，高TMP（跨膜壓(ya)差）是病(bing)毒過(guo)濾的最劣條件之一。近年來(lai)的報告表明，過(guo)濾過(guo)程中(zhong)的壓(ya)力釋放以及之后的再加壓(ya)會影響病(bing)毒去除效(xiao)果。

不同的病毒滅活/去除工藝有著不同的優劣勢與應用領域，實際生產中，應根據潛在污染病毒的特性，結合產品特性和生產工藝、病毒清除工藝的作用機制和清除能力的綜合評估，選擇適宜的病毒清除工藝。

武漢珈(jia)創生(sheng)(sheng)物技術股份有限公司(si)，創建于(yu)2011年，是(shi)一家集生(sheng)(sheng)物技術服務與研發(fa)為(wei)一體的(de)高新技術企(qi)業，專(zhuan)注于(yu)為(wei)生(sheng)(sheng)物藥品(pin)(pin)/制品(pin)(pin)的(de)生(sheng)(sheng)產企(qi)業及研發(fa)機構提供(gong)各類細(xi)胞（含重組細(xi)胞、干細(xi)胞、免疫細(xi)胞等）及原(yuan)輔料的(de)質量檢測、病毒清除工藝驗證技術服務。

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