珈創生物 —— 生物技術服務(wu)與研發為(wei)一體的高(gao)新技術企業
優質高效透(tou)明
High quality, efficient and transparent
中國藥典要求對細胞系進行檢定，NMPA、FDA、EMA、世界衛生組織（WHO） 和人類用藥注冊技術要求協調國際會議（ICH）的各種法規文件概述了對細胞庫檢定的要求和指導，以確認細胞的起源和歷史，并鑒定和測試細胞的身份，穩定性和純度。
細胞檢定主要包括幾個方面：細胞鑒別、無菌檢查、支原體檢查、內外源病毒因子檢查、成瘤性/致瘤性檢查等。
這些檢測項目對于 MCB 細胞和 WCB 細胞及生產限定代次細胞均適用。
我們建議在藥物生產的各個階段對哺乳動物和非哺乳動物細胞系進行檢定，包括：
主細胞庫（MCB） 工作細胞庫（WCB） 生產終末細胞（EOPC） 病毒種子庫（VSS） 原材料及最終產品
細胞系(xi)檢測
細胞鑒別試驗
新建細胞系/株、細胞庫和生產終末細胞應進行鑒別試驗，以確定為本細胞，且無其他細胞的交叉污染。珈創生物提供多種鑒別試驗，客戶可選擇一種或多種方法對其細胞系(xi)/株進(jin)行(xing)種屬鑒別。
染色(se)體核型(xing)分(fen)析(xi)
核(he)(he)型(xing)分析(xi)的結果可以確認樣品(pin)的細胞(bao)(bao)(bao)系身份和來(lai)源(yuan)物種(zhong)。我們(men)擁有多種(zhong)細胞(bao)(bao)(bao)（包括人(ren)(ren)源(yuan)細胞(bao)(bao)(bao)，人(ren)(ren)源(yuan)干細胞(bao)(bao)(bao)，猴 Vero，倉(cang)鼠(shu) CHO）核(he)(he)型(xing)細胞(bao)(bao)(bao)分析(xi)的豐富(fu)經驗。
染色體(ti)核型分(fen)析包括但不(bu)限于(yu)：中期染色體(ti) G 顯帶(dai)分(fen)析和染色體(ti)計(ji)數（提供二倍體(ti)染色體(ti)數，頻率分(fen)布(bu)和多倍體(ti)水平）。
同工酶試驗
對細(xi)胞乳酸(suan)(suan)脫氫酶(mei)（LD）、6-磷酸(suan)(suan)葡(pu)萄糖脫氫酶(mei)（G6PD）和核苷磷酸(suan)(suan)化酶(mei) （NP）三種酶(mei)分別進行凝膠電泳試驗，并通過(guo)與指示(shi)細(xi)胞對比，確定(ding)有無(wu)交叉污染。
短(duan)串聯重復序(xu)列分析(STR)
STR（短串聯重復序列）分析法(fa)即(ji)通過提取樣品(pin) DNA，PCR 擴增 STR 位點， PCR 產物檢(jian)測，檢(jian)測結果分析，并與(yu) ATCC 和 DSMZ 數據庫進行(xing)比(bi)對，以確定樣品(pin)種屬來源(yuan)，判(pan)斷(duan)其是否存(cun)在(zai)其他(ta)人(ren)源(yuan)細胞交叉污染。
無菌檢查
參(can)考中(zhong)國藥典通則 1101，提供(gong)符合法(fa)規要求的(de)薄膜過濾法(fa)和直接(jie)(jie)接(jie)(jie)種法(fa)。無菌(jun)檢查(cha)均在 A 級隔離器或(huo) C+A 級環境中(zhong)進行，且在檢測過程中(zhong)持續進行環境監測。
適用(yong)性(xing)檢(jian)(jian)查：均可按照法(fa)規的(de)(de)要求，對不同的(de)(de)供試(shi)(shi)品進行適用(yong)性(xing)試(shi)(shi)驗。 以確(que)認所采用(yong)的(de)(de)方法(fa)適合(he)供試(shi)(shi)品的(de)(de)無菌檢(jian)(jian)查。
薄(bo)膜過(guo)濾(lv)法：采用封閉式薄(bo)膜過(guo)濾(lv)器，可過(guo)濾(lv)大量(liang)供(gong)試品以及(ji)利于(yu)解決供(gong)試品中可能存(cun)在微生物(wu)生長抑制劑(ji)等問(wen)題。是可過(guo)濾(lv)供(gong)試品首選的檢測方法。
直接接種法(fa)：適用(yong)于無法(fa)用(yong)薄膜過濾法(fa)進行檢(jian)測的供試(shi)品(pin)，包括混懸液等非(fei)澄清水溶液、固體供試(shi)品(pin)、非(fei)水溶性供試(shi)品(pin)和滅(mie)菌醫療器械等。
分枝桿菌檢查
珈創(chuang)生物參考中國(guo)藥(yao)典通則 1101，采用 Middlebrook 7H10 平板培養法，提供符合法規要求的分枝桿(gan)菌檢查。檢查均在(zai)A級隔離器或C+A級環境中進(jin)行(xing)(xing)，且在(zai)檢測過程中持續進(jin)行(xing)(xing)環境監(jian)測。
支原(yuan)體檢查
珈創生物參考中(zhong)國(guo)藥典通則 3301，提供符合法(fa)規要(yao)求的支原體(ti)檢查包括培養法(fa)和指示(shi)細胞(bao)培養法(fa)（DNA 染(ran)色法(fa)）。
培(pei)養(yang)(yang)法：供試品分別接種固體(ti)(ti)和液體(ti)(ti)培(pei)養(yang)(yang)基(ji)，于接種一周后取(qu)液體(ti)(ti)培(pei)養(yang)(yang)基(ji)轉種進行(xing)次(ci)代培(pei)養(yang)(yang)，觀察初(chu)代培(pei)養(yang)(yang)和次(ci)代培(pei)養(yang)(yang)結果(guo)。
指示(shi)細胞培養法(fa)（DNA 染色(se)法(fa)）：供(gong)試品(pin)接種于對照細胞，培養 3-5 天后傳代再(zai)培養 3-5 天，于培養期末進行(xing)染色(se)觀察。
內外(wai)源病毒污(wu)染檢查
檢(jian)查(cha)細胞(bao)系/株中(zhong)(zhong)是否有來(lai)(lai)源(yuan)物種中(zhong)(zhong)潛在的(de)(de)可傳(chuan)(chuan)染的(de)(de)病毒，以(yi)及(ji)由于(yu)使用的(de)(de)原 材料或操作帶入的(de)(de)外源(yuan)性(xing)病毒。細胞(bao)進行病毒檢(jian)查(cha)的(de)(de)種類(lei)及(ji)方(fang)法(fa)(fa)，須根據細胞(bao)種屬來(lai)(lai)源(yuan)、組織來(lai)(lai)源(yuan)、細胞(bao)特性(xing)、傳(chuan)(chuan)代歷史、培養方(fang)法(fa)(fa)及(ji)過(guo)程等確(que)定(ding)。 在您開展檢(jian)測前，珈(jia)創愿(yuan)意與您進行充分的(de)(de)溝通，確(que)定(ding)合適的(de)(de)檢(jian)測方(fang)案。
細(xi)胞形態觀察及血吸附(fu)試驗
體外不同指示細胞(bao)接(jie)種(zhong)培(pei)養(yang)法(fa)
動物體內接種(zhong)法
乳(ru)鼠腦內及腹腔接種法
小鼠腦內及(ji)腹腔接種(zhong)法(fa)
豚鼠腹腔接種法(fa)
家兔皮(pi)內(nei)及(ji)皮(pi)下(xia)接種法(fa)
雞胚接種法
雞(ji)胚卵黃囊接種(zhong)法
雞胚尿囊(nang)腔接(jie)種及(ji)尿囊(nang)液血凝試驗(yan)
逆轉錄病毒(du)檢(jian)測
逆轉錄酶活性測定法 PERT
感染性(xing)試驗(yan)
透射電(dian)鏡觀察(cha)法
種屬特異性外(wai)源病毒因子(zi)檢測
應根(gen)據細胞系/株(zhu)種屬來源(yuan)(yuan)、組織(zhi)來源(yuan)(yuan)及供體(ti)健(jian)康狀況等確(que)定檢(jian)測病毒(du)的種類。
鼠源細(xi)胞系(xi)
鼠源病毒檢查
人源細胞系/株(zhu)
人源病(bing)毒檢測Q-PCR法
牛源性病毒(du)檢測
細胞培養法
熒光抗體檢(jian)測法
豬源(yuan)性病毒檢測
細胞培養法
普通PCR法
Q-PCR法
其他特(te)定病毒(du)檢測
鼠細(xi)小病毒檢測
細胞培養法
普通PCR法
Q-PCR法
杯狀病(bing)毒（Vesivirus 2117）檢測--Q- PCR法 CHO細胞系
成瘤(liu)性檢查(cha)
動物體內接種法（裸鼠）
軟瓊(qiong)脂克隆形成試驗
干細胞等不同類別細胞治療產品的生產過程都會涉及細胞的離體培養。而細胞離體培養必然會涉及生物學屬性的變化、生物學安全性改變、外源性污染、交叉污染等問題，這些問題嚴重影響研發初始到生產過程的進展和成功。干細胞產品的多樣性、復雜性對于其質量控制提出巨大的挑戰。
干細胞的綜合質量要求可歸納為基本生物學屬性，微生物學安全性，生物學安全性及生物學有效性四大類，珈創生物期待與您進行充分的溝通，確定合適的干細胞質量控制方案。
基本生物學屬性
細胞鑒別：
染色(se)體(ti)核型分析(xi)
同工酶試驗
短串(chuan)聯重(zhong)復序列分析(STR)
細胞活性鑒(jian)別：
細胞計數和細胞存活(huo)率檢測
細(xi)胞生(sheng)長(chang)曲線測定
細胞(bao)周(zhou)期測定--PI 染色法
微生(sheng)物安全性(xing)評價(jia)
微(wei)生(sheng)物(wu)(wu)安全性方(fang)面，包括(kuo)各類干(gan)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)在(zai)內(nei)(nei)的(de)(de)(de)(de)所(suo)有(you)治(zhi)療性細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)產品需具備(bei)生(sheng)產用細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)基質的(de)(de)(de)(de)微(wei)生(sheng)物(wu)(wu)安全性。需要(yao)對(dui)相關(guan)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)進行無菌(jun)，支原體，分枝桿(gan)菌(jun)，內(nei)(nei)外(wai)源特異(yi)或非特異(yi)性病毒，內(nei)(nei)毒素微(wei)生(sheng)物(wu)(wu)代謝產物(wu)(wu)的(de)(de)(de)(de)檢(jian)測。另外(wai)，在(zai)干(gan)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)的(de)(de)(de)(de)獲取，擴增，培養(yang)傳代和凍存(cun)過程中，應對(dui)所(suo)使用材料(liao)相關(guan)的(de)(de)(de)(de)可能的(de)(de)(de)(de)動物(wu)(wu)源性微(wei)生(sheng)物(wu)(wu)污(wu)染進行檢(jian)測。
珈創可提供相應的檢測服務(wu)，鏈接(jie)（，）
生物安(an)全性評(ping)價
干(gan)(gan)細胞(bao)(bao)(bao)的生(sheng)(sheng)物學(xue)安全性主要由其細胞(bao)(bao)(bao)生(sheng)(sheng)物學(xue)特性，細胞(bao)(bao)(bao)來源，制備工藝等相關風(feng)險因(yin)素(su)決定，各種(zhong)風(feng)險因(yin)素(su)可導致(zhi)細胞(bao)(bao)(bao)產品的異(yi)常免疫反應(ying)，致(zhi)瘤性和(he)(he)/或促瘤性等，目前干(gan)(gan)細胞(bao)(bao)(bao)生(sheng)(sheng)物安全性評價以免疫學(xue)反應(ying)和(he)(he)致(zhi)瘤性為主要內容。
成瘤性檢查
端(duan)粒酶活性檢查
免疫學反(fan)應檢(jian)測(ce)
淋(lin)巴細(xi)胞增(zeng)殖抑制(zhi)試驗
特定淋巴細胞亞群(qun)檢測法（Th1,Th17,Treg）
淋(lin)巴細胞分(fen)泌(mi) TNF-α抑制試驗(yan)
生物(wu)學(xue)有效(xiao)性檢查
珈(jia)創生物(wu)對于(yu) MSC 的生物(wu)學有效性(xing)可開(kai)展(zhan)相應的檢測服務(wu)。
生物學(xue)有效(xiao)性評價
成骨(gu)細(xi)胞分化試驗(yan)
成(cheng)軟骨細胞分(fen)化試驗
成(cheng)脂細胞分化試(shi)驗
珈創生(sheng)物在生(sheng)物制品的(de)質量控(kong)制領域(yu)不停探(tan)索，為(wei)您(nin)提供可(ke)靠的(de)檢測服務，新的(de)檢測服務持續開發中。
病毒種(zhong)子批(pi)質量(liang)檢測服務
生物制品生產用菌毒種應采用種子批系統，應進行生物學特性，生化特性等檢測，珈創生物結合中國藥典規定，為客戶提供一定程度的病毒種子批和菌種檢測服務。
病毒種(zhong)子批檢(jian)測服務
無菌檢查
支原體檢查
分枝桿(gan)菌檢查
外源病(bing)毒因子檢查
病毒滴度(du)測定
菌種(zhong)檢測服務(wu)
原核或真核系統表達、生產生物制品，應對其重組菌（細菌、酵母菌）進行相應的鑒定和質量檢測，符合相關規定方可使用。
菌種檢測服務(wu)
菌株染(ran)色(se)觀(guan)察
普通染色
革(ge)蘭氏染色
菌(jun)落形態(tai)觀察
菌株抗生素抗性試(shi)驗
菌株生化特征分(fen)析(xi)--生化反(fan)應試(shi)驗
菌種(zhong)檢查(cha)--核酸(suan)序列(lie)測序分(fen)析
噬菌(jun)體(ti)污(wu)染檢查
透(tou)射電鏡觀(guan)察--負染(ran)色法析
培(pei)養觀察(cha)--噬斑法
原材料檢測服務
對于不同風險級別原材料的質量控制，應充分考慮來源于動物（或人）的生物原材料可能帶來的外源因子污染的安全風險。
根據原材料的來源、生產以及對生物制品潛在的毒性和外源因子污染風險等將生物制品生產用原材料按風險等級別劃分，對于不同風險級別原材料，應充分考慮可能帶來的外源因子污染的安全性風險進行檢測。
珈創生物能夠針對性的對生產過程中所用的原料進行檢定，通過無菌，支原體，病毒外源因子，內毒素等檢測，來證明生產過程的細胞培養成分，添加物和胰酶等的質量。基因治療藥物生產過程中的質粒 DNA 也可進行相應的檢定。
無菌檢查
支原體檢查
外源因子檢測
動物來源(yuan)(yuan)原(yuan)材料牛(niu)源(yuan)(yuan)病毒(du)測試
動(dong)物來源原(yuan)材料豬(zhu)源病毒測試
動物來源(yuan)原材料(liao)鼠源(yuan)病毒測試
內毒素檢測
無論是原核或真核系統表達、生產生物制品，都存在不同程度的殘留物于產品中，因此，殘留物的檢測是必需的，否則嚴重影響產品質量。
如：牛血清白蛋白(Bovine serum albumin，BSA)是胎牛血清中的主要成分，廣泛應用在抗體藥物、疫苗藥物以及CGT藥物等生物制品的生產過程中。對于疫苗類藥物，目前很多病毒性疫苗產品（如狂犬、麻疹、腮腺炎、風疹、水痘疫苗等）是采用細胞培養法生產的，因此牛血清白蛋白(BSA)殘留量的檢測是疫苗產品中重要的質控指標，直接關系到疫苗使用的安全性。
如：抗生素殘留對人體健康有著十分嚴重的危害，包括“三致”（致癌、致畸、致突變）作用、人體對此類藥物的長期暴露，通常不會造成急性中毒，而主要是引起慢性中毒。
抗生素不是疫苗中的必須成分，但在一些疫苗的制備過程中，為了防止細菌污染，所以要添加一些抗生素。在最終成品前，還要盡量去除抗生素。
《中國藥典 2020版 三部》中各種疫苗藥物的BSA的殘留量都進行了明確規定：原液應不高于50ng/ml（除甲型肝炎滅活疫苗），成品應不高于50ng/劑。
我司參照以上法規要求，搭建了相應的殘留物檢測技術體系，具體項目如以下表格：
表 1 原材料檢定項目匯總表
| 序號 |
類別(產品/項目/參數) |
產品/項目/參數 |
參考法規
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| 序號 | 名稱 | |||
| 1 |
殘(can)留物檢(jian)測 |
1.1 |
牛血清白(bai)(bai)蛋(dan)白(bai)(bai)殘留檢測法 |
《中國藥(yao)典 2020版 三部(bu)》各(ge)論、通則3407 /3408/ 3411 |
| 1.2 |
抗生素殘留檢測--培養(yang)法 （含青霉素、鏈霉素） |
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1.3 |
CHO細胞DNA殘留檢測法 |
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鏈接：
在慢病毒載體的生產過程中，因穿梭載體、包裝載體及包裝細胞中的內源性逆轉錄元件之間，或病毒載體與細胞的內源性逆轉錄元件之間發生重組可能產生具有復制能力的慢病毒，即復制型慢病毒（replication competent lentivirus, RCL）。鑒于RCL潛在的威脅，FDA及歐盟先后出臺了相關文件，要求在在生產及應用的不同階段進行RCR/RCL的控制，包括生產病毒的細胞庫、終末細胞、病毒載體及轉導細胞，并對CAR-T細胞回輸后的患者個體進行監測。
敏(min)感細胞共培(pei)養測定法
將可(ke)能(neng)存在RCL風(feng)險的樣品在敏(min)感細(xi)胞上擴增(zeng)，并在指示(shi)終點(dian)利用敏(min)感、快速(su)的檢測方法（ELISA p24蛋白測定(ding)法、Q-PCR法、產(chan)物增(zeng)強性逆轉錄(lu)酶活(huo)性檢測法（PERT））進(jin)行(xing)檢測。
構建(jian)HIV-1弱毒(du)株(zhu)作為RCL實驗的陽性(xing)對照(zhao)病毒(du)，設(she)置(zhi)陰性(xing)對照(zhao)、陽性(xing)對照(zhao)和抑制對照(zhao)，驗證反(fan)應體(ti)系的適用性(xing)，監測反(fan)應靈敏(min)度。
RCL檢(jian)測(ce)方法已經(jing)過方法驗證，可滿足不同類型(xing)供試品的檢(jian)測(ce)需求。
主要(yao)法(fa)規(gui)依(yi)據
《CAR-T細胞治療產(chan)品(pin)質量(liang)控制(zhi)檢測研(yan)究(jiu)及非臨床研(yan)究(jiu)考(kao)慮要點》，中國(guo)食品(pin)藥品(pin)檢定研(yan)究(jiu)院(yuan)，2018
《體外基(ji)因修飾系統藥(yao)學研究與評(ping)(ping)價技術(shu)指導原則（試行）》，國家藥(yao)品監督管(guan)理局藥(yao)品審(shen)評(ping)(ping)中(zhong)心，2022
《免疫細(xi)胞治療產品藥(yao)學研究與評價技術指導原(yuan)則(ze)（試行）》，國家藥(yao)品監督管理局(ju)藥(yao)品審評中心(xin)，2022
Guidance for Industry: Testing of Retroviral Vector-Based Human Gene Therapy Products for Replication Competent Retrovirus During Product Manufacture and Patient Follow-up ，FDA，2020
Guidance for Industry: Chemistry, Manufacturing, and Control (CMC) Information for Human Gene Therapy Investigational New Drug Applications (INDs) ，FDA，2020
EUROPEAN PHARMACOPOEIA 10.0
珈(jia)創生物(wu)(wu)在生物(wu)(wu)制品(pin)的質量控制領域(yu)不停(ting)探索，為您提(ti)供可靠的檢測(ce)服務，新(xin)的檢測(ce)服務持續開發中。
