1. 新建細胞系/株以及新型(xing)細胞基質。

2. 某些(xie)傳代(dai)細胞已證明在一定代(dai)次內不具有(you)成(cheng)瘤性，而超過一定代(dai)次則具有(you)成(cheng)瘤性（如Vero）。

3. 用于疫苗生產的細胞(bao)系/株應進行成瘤性檢查，但當(dang)未經(jing)遺傳(chuan)修(xiu)飾的二倍體細胞(bao)被證明無成瘤性后，可(ke)以(yi)不作為常規檢查要求。

注：已證明具有成瘤性的傳代細胞（如BHK21，CHO，C127等），或細胞類型屬成瘤性細胞（如雜交瘤細胞等），用于生產治療性產品時可以不再做成瘤性檢查。

目前使用比較廣泛的成瘤性檢查方法有動(dong)物接種法（體內）和軟瓊脂克(ke)隆形成(cheng)實驗(yan)（體外）。其中，體內(nei)法為(wei)評(ping)價的標準，但(dan)對(dui)某些細胞而言，體外(wai)法的結果也(ye)可以作(zuo)為(wei)細胞成(cheng)瘤(liu)性檢(jian)查的參考(kao)，尤其是低代次、在動物(wu)體內(nei)無成(cheng)瘤(liu)性的傳代細胞系。

將待檢測(ce)細(xi)胞(bao)(bao)接種于(yu)皮下或(huo)(huo)者肌肉內注射。至少觀(guan)察16周接種部(bu)位是(shi)否有(you)(you)進(jin)行性結節形成(cheng)，對出現的結節開始消(xiao)退的動物(wu)(wu)，應在(zai)觀(guan)察期末處死。不能形成(cheng)進(jin)行性結節的細(xi)胞(bao)(bao)，不視(shi)為(wei)具有(you)(you)成(cheng)瘤(liu)(liu)性。通(tong)常用(yong) HeLa 或(huo)(huo) HeLa S3細(xi)胞(bao)(bao)或(huo)(huo)其(qi)他已知成(cheng)瘤(liu)(liu)性細(xi)胞(bao)(bao)作陽性對照(zhao)，且對照(zhao)組至少設(she)10只動物(wu)(wu)，試驗才(cai)視(shi)為(wei)有(you)(you)效。在(zai)觀(guan)察期末，處死所有(you)(you)動物(wu)(wu)，對注射部(bu)位及其(qi)他部(bu)位 (如心臟、肺、肝(gan)、脾(pi)、腎、腦及局部(bu)淋巴結)進(jin)行觀(guan)察和組織病(bing)理(li)學檢查，判(pan)斷是(shi)否有(you)(you)接種細(xi)胞(bao)(bao)增生，進(jin)一步判(pan)定接種細(xi)胞(bao)(bao)是(shi)否形成(cheng)腫瘤(liu)(liu)或(huo)(huo)有(you)(you)轉(zhuan)移瘤(liu)(liu)。

使用低熔點(dian)瓊(qiong)脂模擬細(xi)胞在體內的微(wei)環(huan)境培(pei)養(yang)細(xi)胞，通常(chang)(chang)使用其它已知具(ju)有(you)成瘤性的細(xi)胞作(zuo)(zuo)為陽性對照，對照組(zu)與(yu)實驗組(zu)同步操作(zuo)(zuo)。常(chang)(chang)規培(pei)養(yang)3周(zhou)左右(you)，培(pei)養(yang)過(guo)程中可視情況適當地補充(chong)細(xi)胞培(pei)養(yang)液，直到(dao)陽性組(zu)在顯(xian)(xian)微(wei)鏡(jing)下明顯(xian)(xian)觀察到(dao)大量(liang)細(xi)胞集落，培(pei)養(yang)終止。使用4%多聚甲(jia)醛(quan)固定(ding)，結(jie)晶紫染色，在顯(xian)(xian)微(wei)鏡(jing)下觀察并拍照記錄。

歐洲EMA、美國FDA以及WHO針對干細胞、體細胞、成體干細胞、轉基因細胞、基因治療產品以及生產用動物細胞培養物等發布了多項指導原則。EMA在《人體細胞醫療產品的指導原則》中表示“如果可以預見細胞轉化風險則應該展(zhan)開成瘤性研究，重點檢測其增殖(zhi)能力(li)以及染色體完整性”，在《干細胞醫療產品反思文件》中提到“多能干(gan)細(xi)胞(bao)和(he)體干(gan)細(xi)胞(bao)都存在腫瘤形成(cheng)風險(xian)，培養條(tiao)件可能會嚴重影響干(gan)細(xi)胞(bao)的(de)(de)基因組的(de)(de)不穩定，延長(chang)細(xi)胞(bao)培養有助于評估成(cheng)瘤性和(he)染(ran)色體穩定性”。

FDA指(zhi)導(dao)原則認為控制hESC衍生(sheng)的細(xi)胞(bao)產品(pin)(pin)中(zhong)未分(fen)化的ESC或其他細(xi)胞(bao)雜質水平(ping)是(shi)成瘤(liu)(liu)性(xing)風(feng)險評價的主要方面，采用細(xi)胞(bao)增殖測(ce)定(ding)法和軟瓊脂(zhi)集(ji)落形(xing)成法測(ce)定(ding)惡性(xing)轉化細(xi)胞(bao)，以檢(jian)測(ce)最終產品(pin)(pin)中(zhong)的雜質細(xi)胞(bao)是(shi)否(fou)超過了最小腫瘤(liu)(liu)產生(sheng)劑量。FDA還重點討論了臨(lin)床(chuang)前(qian)實驗物種的選(xuan)擇和動物模(mo)型的預測(ce)能力，以評估(gu)植(zhi)入細(xi)胞(bao)到達移(yi)植(zhi)部位微環境中(zhong)是(shi)否(fou)形(xing)成腫瘤(liu)(liu)，以及引起(qi)宿主細(xi)胞(bao)和植(zhi)入細(xi)胞(bao)在各組織器官(guan)中(zhong)發(fa)生(sheng)腫瘤(liu)(liu)轉化的風(feng)險。