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發布時間：2022-12-14 16:22 信息來(lai)源： 閱(yue)讀(du)次(ci)數： 次(ci)
人間充質干細胞（human mesenchymal stem cells, hMSCs）是一類存在于不同組織間質或血管周圍、形態類似于成纖維細胞的成體干細胞，可在體外自我更新并具有成骨(gu)、成脂(zhi)、成軟骨(gu)等分化能(neng)力。hMSCs具有獨特的、與治(zhi)療疾病密切相關的生物(wu)學有效性(biological effectiveness)，因(yin)此(ci)已(yi)成為臨床(chuang)研究中發展最為迅速的一類(lei)干細(xi)胞，具有廣泛的臨床(chuang)應用價值。
hMSCs質量屬性
臨床應用的hMSCs應具有四類質量屬性：基本細胞(bao)生(sheng)物(wu)(wu)學屬性(xing)，微生(sheng)物(wu)(wu)學安全(quan)性(xing)，生(sheng)物(wu)(wu)學安全(quan)性(xing)和生(sheng)物(wu)(wu)學有效性(xing)。其中生物學有(you)(you)效(xiao)性與hMSCs臨(lin)床治(zhi)療效(xiao)應(ying)密切(qie)相關，是臨(lin)床前研究階段(duan)(duan)用于預(yu)測臨(lin)床治(zhi)療效(xiao)應(ying)，是現(xian)階段(duan)(duan)乃至未來(lai)(lai)決定hMSCs臨(lin)床轉(zhuan)化(hua)是否(fou)能成(cheng)功的(de)(de)重要質(zhi)量屬(shu)性。不同組(zu)織來(lai)(lai)源的(de)(de) hMSCs生物學有(you)(you)效(xiao)性質(zhi)量屬(shu)性，可歸類(lei)為(wei)誘(you)導分化(hua)功能、免疫調(diao)控能力及組(zu)織再(zai)生功能，而每一類(lei)別中又(you)含(han)有(you)(you)細化(hua)的(de)(de)內容(或(huo)質(zhi)量屬(shu)性)。
體外評價hMSCs細(xi)胞向不同譜系的(de)分化能力是hMSCs生物(wu)學有效性質(zhi)量(liang)評價的(de)關鍵(jian)質(zhi)量(liang)屬性，接下來就hMSCs的(de)(de)生物學有效性評價中的(de)(de)多(duo)向分化(hua)潛能作(zuo)詳細介紹。
hMSCs多向分化潛能及其檢測方法
hMSCs在特定體外誘導分化培養條件下，具有向內、中、外胚層不同細胞系分化的潛能。在體外質量評價實驗中，可以通過特定的誘導條件將hMSCs向特定功能細胞分化，進而運用不同檢測技術對分化細胞的相關生物學特性或功能進行評價。目(mu)前(qian)普遍(bian)接受(shou)由ISCT于2006年首次提(ti)出的以成骨(gu)、成脂、成軟骨(gu)細(xi)胞(bao)誘(you)導(dao)分(fen)化能(neng)力的評價方法。
一、 hMSCs成骨細胞誘導分(fen)化：
在體外培養條件下，經過特定誘導條件使hMSCs分化發育為成骨細胞。通常將這個分化過程劃分為細胞增殖期、分化早期、分化中晚期三個階段。hMSCs 在貼壁后就開始進入細胞增殖階段，以DNA復制和組蛋白合成為特征。分化早期則以堿性磷酸酶活性升高、I型膠原分泌為特征，同時還伴有細胞增殖抑制。分化中晚期主要以鈣離子的沉積為特征。故常通過檢測鈣離子沉(chen)淀“鈣結(jie)節”的(de)量來表示成骨(gu)分化的(de)強(qiang)弱。
茜(qian)素(su)(su)(su)紅S是橙黃色(se)(se)的(de)針狀體，由茜(qian)素(su)(su)(su)經發煙硫酸磺化，然后轉變為鈉鹽(yan)(yan)制得。屬一種(zhong)蒽醌(Anthraquinone)類的(de)衍生物，是茜(qian)素(su)(su)(su)磺酸鈉鹽(yan)(yan)，它能與鈣鹽(yan)(yan)以(yi)鰲和方式形(xing)成橘紅色(se)(se)復合物，用(yong)以(yi)識別(bie)組織細胞的(de)鈣鹽(yan)(yan)成分。經茜(qian)素(su)(su)(su)紅(alizarin red)染色(se)(se)呈(cheng)陽(yang)性，提示成骨誘導分化后細胞內可形(xing)成礦化基(ji)質。
二、 hMSCs成(cheng)脂細(xi)胞誘(you)導(dao)分化：
人和哺乳動物體(ti)內的(de)脂肪(fang)(fang)(fang)組(zu)(zu)織(zhi)可以分(fen)為(wei)(wei)白色(se)(se)脂肪(fang)(fang)(fang)組(zu)(zu)織(zhi)和棕(zong)(zong)色(se)(se)脂肪(fang)(fang)(fang)組(zu)(zu)織(zhi)，兩種(zhong)脂肪(fang)(fang)(fang)組(zu)(zu)織(zhi)的(de)細胞(bao)中(zhong)均含有(you)脂肪(fang)(fang)(fang)，但是他(ta)們在(zai)(zai)分(fen)布位置(zhi)和結構功能(neng)(neng)上(shang)有(you)所(suo)區別(bie)。白色(se)(se)脂肪(fang)(fang)(fang)組(zu)(zu)織(zhi)普遍分(fen)布在(zai)(zai)皮下(xia)組(zu)(zu)織(zhi)和內臟周圍(wei)，主要起能(neng)(neng)量(liang)倉庫的(de)作用，將多(duo)余的(de)能(neng)(neng)量(liang)以脂肪(fang)(fang)(fang)的(de)形(xing)式儲存(cun)起來。棕(zong)(zong)色(se)(se)脂肪(fang)(fang)(fang)組(zu)(zu)織(zhi)主要分(fen)布在(zai)(zai)頸(jing)部(bu)兩側(ce)、背(bei)部(bu)上(shang)側(ce)、鎖骨附近和脊柱周圍(wei)，其細胞(bao)內含有(you)大(da)量(liang)線粒體(ti)，可以將食物中(zhong)的(de)能(neng)(neng)量(liang)轉化(hua)為(wei)(wei)熱能(neng)(neng)。
hMSCs在相關誘導分化培養基培養14～28 d后，經油紅O(oil red 0)染色為陽性，根據脂肪組織細胞的特點：細(xi)胞漿(jiang)中含有脂肪滴(di)，可以(yi)通過(guo)油紅O對(dui)細(xi)胞中脂肪滴(di)染色。說明(ming)分化(hua)的細(xi)胞內形(xing)成脂滴(di)。
油紅(hong)(hong)O（蘇丹紅(hong)(hong)）是一種脂(zhi)溶性(xing)偶氮染(ran)料，能特異性(xing)地使組織和細胞(bao)(bao)內中性(xing)甘油三脂(zhi)、脂(zhi)質以及(ji)脂(zhi)蛋白等染(ran)色(se)。油紅(hong)(hong) O 配(pei)成染(ran)色(se)液(ye)用(yong)于(yu)染(ran)色(se)時，可(ke)以通過相(xiang)似相(xiang)溶的(de)(de)原理使組織或細胞(bao)(bao)內的(de)(de)脂(zhi)滴(di)著紅(hong)(hong)色(se)，可(ke)用(yong)于(yu)分(fen)析組織或細胞(bao)(bao)樣本中的(de)(de)脂(zhi)質分(fen)布情況。
三、 hMSCs成軟骨細胞(bao)誘導分化：
具有成軟骨分化能力的hMSCs細胞在誘導培養過程中，可以自發收縮聚集形成細胞微球，并逐漸形成具有一定硬度和彈性并呈白色外觀的軟骨樣子組織。該(gai)組織經阿利新藍染色呈陽性。（在間充質干細胞誘導分化為軟骨細胞后，細胞可以合成并分泌大量細胞外基質，其中包括富含透明質酸的糖胺聚糖，可以被阿利新藍染成藍色。）伴隨軟骨細胞分化，Ⅱ型膠原等軟骨細胞特定基因表達水平會顯著上調，因此可利用在軟骨分化條件下，hMSCs成細胞球能力、形成軟骨組織形態能力、番紅O或阿新藍染色及軟骨特定基因表達上調情況綜合判斷hMSCs成軟骨細胞分化能力。
這種基于三維細胞培(pei)養、形(xing)態學觀察(cha)和(he)阿利新藍染色的(de)檢測方法可以提供相對明(ming)確的(de)成軟骨細胞分化(hua)能力的(de)信息。
相關法規指導
后臺回復“干細(xi)胞(bao)質(zhi)量控制”，獲取相關(guan)指導文件。
武漢珈創生物相關服務
武漢珈創生物(wu)技術(shu)(shu)股份(fen)有限公司，創建(jian)于2011年(nian)，是一家集生物(wu)技術(shu)(shu)服務與研發(fa)為一體的(de)高新技術(shu)(shu)企業(ye)，專注于為生物(wu)藥(yao)品(pin)(pin)/制品(pin)(pin)的(de)生產企業(ye)及研發(fa)機(ji)構(gou)提供各類細胞(bao)（含重組(zu)細胞(bao)、干細胞(bao)、免疫細胞(bao)等(deng)）及原輔料的(de)質(zhi)量檢測、病毒清除工藝驗(yan)證(zheng)技術(shu)(shu)服務。
質量檢測服務
武漢珈創生物可按相關法規或者指導(dao)文件提(ti)供(gong)干細胞(bao)治(zhi)療產(chan)品的各個生產(chan)環節的質量檢(jian)測服務，包括：
基本生物學屬性檢測
細(xi)胞(bao)鑒(jian)別、細(xi)胞(bao)活性檢測(ce)、種屬間細(xi)胞(bao)污(wu)染的檢測(ce)、染色體(ti)核(he)型分析；
微生物學安全性檢測
無(wu)菌檢測、支原體檢測，確保產(chan)品無(wu)微生物(wu)污染(ran)(ran)或代謝產(chan)物(wu)污染(ran)(ran)；
生物學安全性檢測
成瘤(liu)性(xing)和致瘤(liu)性(xing)檢(jian)測(ce)、異(yi)常免疫反應檢(jian)測(ce)、殘留物的檢(jian)測(ce)；
生物學有效性評價
多向分化功能的評價、免疫調控功能的評價、hMSCs組織(zhi)再生功能的評價
干細胞放行快檢
珈創生物自主研(yan)發的放(fang)行快檢技(ji)術，可在6小時內完成，涵蓋細菌(jun)、真菌(jun)和支原(yuan)體快檢技(ji)術，且技(ji)術方法(fa)已成熟(shu)，經過了上百次驗證。
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